Текущее время: 23 окт 2018, 17:08

Сообщения без ответов | Активные темы Непрочитанные сообщения | Новые сообщения | Ваши сообщения





 Страница 1 из 1 [ 1 сообщение ] 
Автор Сообщение
 Заголовок сообщения: ЭЭ vs аспирин и др антикоагулянты - исследование
СообщениеДобавлено: 11 дек 2011, 00:43 
Tech. support

Зарегистрирован: 10 мар 2011, 01:07
Сообщения: 578
Благодарил (а): 73 раз.
Поблагодарили: 39 раз.
Влияние соединений, модифицирующих превращения арахидоновой кислоты в тромбоцитах, на эффекты этинилэстрадиола

А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.Я.Шаповалов
Тюменская медицинская академия, кафедра биохимии.


Введение, цель исследования, материалы и методы

Введение

Ранее мы показали, что один из широко используемых эстрогенов – этинилэстрадиол – активирует у экспериментальных животных коагуляционный и тромбоцитарный компоненты гемостаза в степени, ведущей к снижению толерантности к тромбину, одновременно ограничивая в малой мере процессы ПОЛ в тромбоцитах. Антиоксиданты препятствуют этим изменениям [А.Ш.Бышевский и др., 1999]. Известно, что факторы или воздействия, интенсифицирующие перекисное окисление липидов /ПОЛ/ ускоряют тромбиногенез и, следовательно, повышают свертывающий потенциал [С.Н.Ельдецова, 1990].

Цели исследования

В настоящем исследовании предпринята попытка охарактеризовать механизм влияния этинилэстрадиола на гемостаз. Так как этот эстроген, как сказано выше, оказывает антиоксидантный эффект, мы изучили возможность его активирующего воздействия через изменение скорости превращений арахидоновой кислоты.

Материалы и методы

В качестве одного из модификаторов превращения арахидоната в тромбоцитах использовали ацетилсалициловую кислоту (аспирин), которая согласно ранее полученным в нашей лаборатории данным [С.Л.Галян и др., 1996; А.А.Вакулин, 1998] снижает максимальную АДФ-индуцируемую агрегацию тромбоцитов примерно в 2 раза при дозе 150 мг/кг. Дальнейшее увеличение дозы существенно не влияет на агрегацию и другие параметры; активности тромбоцитов. При этой дозе (DI50%) сохраняется возможность выявлять сдвиги в обоих направлениях, если они возникают при дополнительных воздействиях. Важно и то, что эффект аспирина в этой дозе совпадает с данными о влиянии его однократного введения на агрегацию у человека [К.М.Лакин, В.П.Балуда, 1981]. Продолжительность эффекта при однократном введении - 2 суток [И.А.Дементьева, 1998].
Опираясь на эти данные, мы изучали влияние аспирина (150 мг/кг через 2 дня на третий) на общую коагуляционную активность тромбоцитов, их спонтанную и АДФ-агрегацию, на высвобождение факторов Р3 и Р4 при введении этинилэстрадиола (4,0 мкг/кг ежедневно). Одновременно определяли АВР, АЧТВ и ПДФ [В.П.Балуда и др., 1980]. Подопытных крыс разделили на следующие группы: 1. Интактный контроль; 2. Крысы получали только этинилэстрадиол; 3. Крысы получали аспирин; 4. Крысы получали этинилэстрадиол и аспирин. Отбор проб – на 30-й день.

Эффекты аспирина

Подтвердилось (табл. 1), что этинилэстрадиол активирует тромбоциты. Выявилось и ускорение внутрисосудистого свертывания крови (по данным АВР, АЧТВ и ПДФ).

Таблица 1. Влияние аспирина (150 мг/кг, через 2 дня на 3-й) на агрегацию тромбоцитов на фоне этинилэстрадиола и без него (n = 5)

Аспирин вызвал обратный эффект: тенденция к снижению общей свертывающей активности крови, подтверждаемая достоверным уменьшением концентрации ПДФ, снижением общей коагуляционной активности тромбоцитов, их способности к агрегации и реакции высвобождения.

Одновременное введение этинилэстрадиола и аспирина выявило сложение разнонаправленных эффектов, что выразилось нивелированием сдвигов – все показатели приблизились к контрольным значениям.

Так как аспирин ингибирует циклооксигеназу, не исключено, что этинилэстрадиол препятствует влиянию аспирина на этот энзим или активирует другой участок превращений арахидоновой кислоты.

Влияние индометацина

Параллельно с аспирином аналогичные исследования провели с индометацином, который также ингибирует циклооксигеназу, однако, в отличие от аспирина - обратимо [Honey e. a., 1986]. Индометацин вводили в составе суточной порции рациона через день (эффект сохраняется 2 сут после введения) в дозе DI50%, равной для крыс 60 мг/кг массы [А.А.Вакулин, 1998; И.А.Дементьева, 1998].
Использована та же схема эксперимента, что в опытах с аспирином: 1. Интактный контроль; 2. Крысы получали только этинилэстрадиол; 3. Крысы получали индометацин; 4. Крысы получали одновременно этинилэстрадиол и индометацин. На 30-й день у всех крыс брали пробы, определяя те же показатели.

Таблица 2. Гемокоагуляция и агрегация тромбоцитов при введении этинилэстрадиола и индометацина (n = 5)

Как и в опытах с аспирином, индометацин, в отличие от этинилэстрадиола, снизил активность тромбоцитов и общую свертываемость (табл. 2). При совместном введении этинилэстрадиола и индометацина активации тромбоцитов не наблюдали.
Индометацин, в отличие от аспирина не только ингибирует циклооксигеназу, но и тормозит активность фосфолипазы А2, обладая свойствами антагониста кальция [А.Ш.Бышевский и др., 1996]. Допустим, что этинилэстрадиол активирует циклооксигеназу и поэтому ингибитор энзима (аспирин) устраняет эффект гормона. Способность индометацина устранять эффект этинилэстрадиола на тромбоциты может быть также объяснена его способностью тормозить циклооксигеназу. В противном случае мы не наблюдали бы совпадения показателей активности тромбоцитов при введении одновременно с этинилэстрадиолом аспирина или индометацина.

Влияние делагила

Далее в качестве ингибитора превращений арахидоновой кислоты использовали делагил – ингибитор фосфолипазы А2, т.е. ингибитор высвобождения арахидоната. Дозы делагила с антиагрегантным действием лежат в пределах от 10 до 20 мг/кг [Vane, Moncada, 1980]. Доза делагила, вызывающая торможение агрегации тромбоцитов лабораторных крыс на 50% (DI50%) равна 40 мг/кг. Продолжительность эффекта при использовании этой дозы – двое суток [С.Л.Галян и др., 1997].

Эту дозу (40 мг/кг) вводили через день в составе рациона. Как видно из данных табл. 3, способность делагила снижать активность тромбоцитов проявляется (при одновременном введении с этинилэстрадиолом) ограничением их активации, вызываемой гормоном.

Таблица 3. Гемокоагуляция и агрегация тромбоцитов при введении этинилэстрадиола (4,0 мкг/кг ежедневно) и делагила (40 мг/кг через день) (n = 5).

Ограничивающий эффект выражен слабее, чем тот же эффект аспирина или индометацина. Это подтверждает предположение, согласно которому этинилэстрадиол активирует циклооксигеназу (торможение других этапов превращения арахидоновой кислоты менее заметно сказывается на эффекте этинилэстрадиола).

Эффекты дазоксибена

В очередной серии экспериментов как ингибитор превращений арахидоновой кислоты (по пути образования тромбоксанов) применили дазоксибен - производное имидазола, которое в экспериментах на животных (10 мг/кг) селективно тормозит синтез тромбоксана А2, не изменяя продукции 6-кетопростагландинов. В опытах на животных дазоксибен снимает ускорение продукции тромбоксана А2 при экзогенной тромбинемии [Garsia-Szabo e. a., 1983], что подтверждает способность ингибитора угнетать тромбоксансинтетазу. Согласно ранее полученным нами данным дазоксибен тормозит на 50% агрегацию в дозе 30 мг/кг массы, эффект длится до двух суток [И.А.Дементьева, 1998]. Поэтому мы вводили животным указанную дозу через день, отбирая пробы крови на 30-й день от начала эксперимента.
Дазоксибен также устранил изменения активности тромбоцитов, вызванные этинилэстрадиолом (табл. 4).

Таблица 4. Гемокоагуляция и агрегация тромбоцитов при введении этинилэстрадиола и дазоксибена (30 мг/кг через день, n = 5)

Таким образом, торможение превращений арахидоновой кислоты на одном из трех участков (высвобождение арахидоната, циклооксигеназная реакция и синтез тромбоксанов) снимает эффекты гормона.

Дозозависимое влияние этинилэстрадиола

Ранее отмечена дозозависимость влияния этинилэстрадиола на гемостаз [Anonymos, 1991]. Поэтому, чтобы выяснить, какой из участков трансформации арахидоната чувствительнее к этинилэстрадиолу, провели эксперименты с удвоенной дозой гормона, полагая, что в этом случае (при прежних дозах ингибиторов) выявятся отличия в степени торможения. Использованы: делагил (ингибитор фосфолипаз), аспирин (ингибитор циклооксигеназы) и дазоксибен (ингибитор тромбоксансинтетазы). Препараты вводили в дозах DI50% как в предыдущих опытах, а этинилэстрадиол – в дозе 80 мкг/кг.
Из данных табл. 5 видно, что этинилэстрадиол в удвоенной дозе вызвал большую активацию тромбоцитов, чем в дозе 40 мкг/кг (сравнить с табл. 4). Ограничивающее влияние аспирина и делагила на гемостаз уменьшилось по сравнению с их влиянием на фоне меньшей дозы этинилэстрадиола, а ограничивающий эффект дазоксибена оказался достаточно выразительным. Видимо, этинилэстрадиол активирует тромбоксансинтетазу, т.е. увеличивает генерацию кофактора агрегации тромбоксана В2 - конечного продукта превращений арахидоната по циклооксигеназному пути.
Таблица 5. Гемокоагуляция и активность тромбоцитов при введении удвоенной дозы этинилэстрадиола (80 мг/кг) на фоне ингибиторов превращений арахидоната, вводимых в дозах DI50%

Эффекты этинилэстрадиола на тромбоциты

Ранее мы показали, что этинилэстрадиол как бы конкурирует с ингибиторами превращений арахидоновой кислоты, однако, на фоне угнетения ПОЛ его способность активировать тромбоциты оказывается ограниченной [П.Я.Шаповалов, Э.А.Шабанов, 1999]. В связи с этим мы провели ряд экспериментов по уточнению связи между влиянием этинилэстрадиола на тромбоциты и интенсивностью ПОЛ, оценивая пероксидацию по уровню в тромбоцитах диеновых конъюгатов и ТБК-активных продуктов [В.Н.Ушкалова и др., 1987]. Эксперимент проведен в соответствие со следующей схемой: группа 1-я – контроль; группа 2-я – животные получали этинилэстрадиол (4,0 мкг/кг); группа 3-я – животные получали ацетат свинца (активатор ПОЛ) из расчета 50 мг/кг и этинилэстрадиол (4,0 мкг/кг); группа 3-я – крысы получали ту же соль свинца из расчета 100 мг/кг, и этинилэстрадиол (4,0 мкг/кг). Отбор проб – на 30-й день.

Из данных табл. 6 видно, что эффекты этинилэстрадиола на тромбоциты связаны с изменением интенсивности ПОЛ, однако, зависимость эта слабо выражена: изменения ПОЛ сопровождаются изменениями активности тромбоцитов в малой степени.

Таблица 6. Прокоагулянтная активность тромбоцитов и ПОЛ в них при введении этинилэстрадиола (4,0 мкг/кг) на фоне свинца (5 крыс в группе)

Влияние димефосфона

Опыты с этинилэстрадиолом на фоне заторможенного ПОЛ проведены с использованием димефосфона по схеме: 1- я группа – контроль; 2-я группа – животные получали димефосфон по 1000 мг/кг; 3-я группа – димефосфон по 2000 мг/кг; 4-я группа – димефосфон по 3000 мг/кг. Животные всех групп (исключая контрольную) ежедневно получали этинилэстрадиол по 4,0 мкг/кг в течение 30 дней. Димефосфон также вводили на протяжении всего срока. На 30-й день брали пробы крови.

Таблица 7. Прокоагулянтная активность тромбоцитов и ПОЛ в них при введении этинилэстрадиола (4,0 мкг/кг) на фоне димефосфона (n=5)

Данные табл. 7 позволяют увидеть следующее:
- антиоксидант в наименьшей из используемых доз усиливает эффект этинилэстрадиола на ПОЛ, не обнаруживается в этом случае активирующее действие гормона на тромбоциты – наоборот, несколько снижается индуцированная агрегация (МА) и высвобождение тромбоцитарных факторов Р3 и Р4.(группа 2-я);
- в удвоенной дозе антиоксидант угнетает ПОЛ в тромбоцитах, то же относится к прокоагулянтной активности тромбоцитов по всем показателям (группа 3-я);
- при введении увеличенной в три раза дозы антиоксиданта обнаруживается снижение интенсивности ПОЛ, выраженное в заметно большей степени, выявляется и более значимое ограничение активности тромбоцитов (группа 4-я).

Заключение

Можно заключить, что влияние этинилэстрадиола на тромбоциты определяется его свойством активировать циклооксигенащзу и зависит от состоянием процессов ПОЛ. Видимо, активация тромбоцитов через ускорение превращений арахидоновой кислоты, ведущих к накоплению тромбоксанов, ограничивается антиоксидантами, смягчающими эффект продуктов пероксидации на агрегацию, как это показано ранее [И.В.Ральченко, 1998].
Независимо от того, сколь верным окажется это объяснение (исследования продолжаются), целесообразна попытка использовать мягкие антиоксиданты из числа природных для ограничения гемостатических сдвигов при назначении гормональных контрацептивов или заместительной гормональной терапии.

более подробно (с таблицами и пр.) см.
http://www.hemostas.ru/society/publications/p8.shtml


Не в сети
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
 Страница 1 из 1 [ 1 сообщение ] 


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  

cron